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實驗大鼠固定架的售價貴嗎
來源:未知 |發布時間:2021-06-11 16:58|點擊:
  建模方法
  
  所述模型的建立方法,按如下步驟操作:
  
  (1)注射雌激素:所有實驗小鼠(包括供體鼠和受體鼠)頸背部皮下注射苯甲酸雌二醇溶液150μg/kg,每4天注射1次,共注射兩次。
  
  (2)從注射雌激素開始至腹腔種植當日,每日定時對供體鼠和受體鼠進行陰道脫落細胞涂片檢查,觀察小鼠動情周期。動情周期判斷依據如下:動情前期:圓形或橢圓形的有核上皮細胞為主,夾有少量角化細胞和白細胞;動情期:幾乎全是無核的角化細胞;動情后期:角化細胞減少,出現有核上皮細胞和白細胞;動情間期:細胞少而皺縮,白細胞為主。
  實驗大鼠固定架
  (3)種植前標本準備:供體小鼠的子宮取出用預冷的生理鹽水清洗血液和粘液,將子宮一分為二分別放入盛有0.5mL預冷的RPMI1640培養基的培養皿中,用眼科剪將子宮縱向剖開,剝離子宮內膜層并迅速將其剪成體積≤1mm
  
  3的內膜碎片制成懸浮液備用。
  
  (4)腹腔注射內膜:受體小鼠腹部皮膚消毒后,以1mL注射器針筒接20mL注射器針頭,以小鼠下腹部正中尿道口上方0.5cm處為進針點,將子宮內膜碎片注射入受體小鼠腹腔,針孔處涂抹適量青霉素軟膏預防感染,供體鼠與受體鼠數量比為1∶2。
  
  從取出供體小鼠子宮到注射子宮內膜碎片入受體小鼠所有操作應在5min內連續完成,全程保持無菌。假手術組注射雌激素的方法與模型組相同,不同的是,假手術組腹腔注射的是等體積的供體小鼠的腹腔脂肪組織。
  
  (5)種植后處理:腹腔種植內膜當日開始對受體小鼠頸背部皮下注射苯甲酸β-雌二醇溶液150μg/kg,每4天注射1次,共注射兩次,之后待內膜自然生長。
  
  1.2.4觀察指標和檢測方法
  
  分別于造模后第1周末、第2周末、第4周末、第6周末脫頸法隨機處死模型組小鼠和假手術組小鼠各8只,經75%乙醇消毒后以2mL預冷的生理鹽水注入小鼠腹腔,腹部充分按摩后收集腹腔灌洗液,取出腹腔種植物,從以下方面觀察和檢測相應指標。
  實驗大鼠開口器
  (1)觀察種植物形態:開腹后觀察小鼠腹腔種
  
  植物的生長部位、形態、顏色、體積等。之后放入4%多聚甲醛溶液,室溫固定24h后常規石蠟包埋切片做HE染色,觀察種植物病理組織形態學特征。
  
  (2)測量種植物體積:種植物取出后用游標卡尺測量其長度、寬度與高度,按公式V=Π/6×長×寬×高[7],計算種植物體積。
  
  (3)腹腔粘連評分:采用Blauer粘連評分系統對小鼠腹腔粘連程度進行評分。評分標準:0分,無粘連;1分,盆腔輕微的膜狀粘連;2分,粘連致密,通常宮角與腸管和膀胱均有粘連;3分,粘連更致密,范圍更廣,雙側宮角均與腸管和膀胱粘連,子宮尚有一定活動度;4分,嚴重的粘連,雙側宮角均與腸管和膀胱粘連,子宮固定不動。粘連評分由兩位實驗人員獨立進行,取兩位實驗人員所評分數的平均值作為最終粘連評分。
  
  (4)TGF-β1表達水平:2mL離心管收集模型組小鼠腹腔灌洗液,4℃,2000rpm,離心15min,留取上清,-80℃冰箱保存。ELISA試劑盒檢測小鼠腹腔灌洗液TGF-β1表達水平。
  
  (5)Masson染色:常規石蠟包埋、切片、脫蠟,Masson三色染色液浸泡15~20min;常規梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。顯微鏡下觀察種植物膠原纖維沉積情況,評估種植物膠原沉積程度。
  實驗大鼠拔牙鉗
  (6)免疫組化:常規石蠟包埋、切片、脫蠟,抗體孵育、封片。纖維化相關蛋白抗體E-cadherin(1∶400)、CollagenI(1∶200)、α-SMA(1∶200)、SMMHCII(1∶300)的表達情況,評估種植物纖維化情況。顯微鏡下觀察免疫組化染色切片,染色區域內顯示為黃棕色或黃褐色為陽性表達,每張切片高倍鏡下拍攝三個不同視野,將采集的所有圖像應用ImageproPlus6.0圖像分析軟件進行分析,計算每張圖像上陽性表達區域的累積光密度(sumIOD),再測量對應陽性表達區域的面積(areaofinterest,AOI),以平均光密度(meanIOD)值作為該圖像陽性表達的定量標準,反映圖像上免疫反應物的表達強度。平均光密度(meanIOD)=累積光密度(sumIOD)/陽性區域面積(AOI)。每個樣品拍攝的三張圖像分析的平均光密度(meanIOD)再作一次平均,作為這個樣品的平均光密度(meanIOD)。針對每個樣本的平均光密度(meanIOD)值,用t檢驗或單因素方差分析比較各組蛋白表達量的統計學差異。

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